PCR實驗室根據使用(yong)(yong)儀器(qi)的(de)(de)(de)(de)功能合(he)理(li)設置(zhi)各(ge)個(ge)(ge)工(gong)作(zuo)區(qu)(qu)(qu)域，如采用(yong)(yong)聚合(he)酶聯反應：則設置(zhi)試劑儲(chu)存和準備(bei)區(qu)(qu)(qu)、標(biao)本制備(bei)區(qu)(qu)(qu)、擴(kuo)(kuo)(kuo)增(zeng)(zeng)區(qu)(qu)(qu)、擴(kuo)(kuo)(kuo)增(zeng)(zeng)產(chan)物(wu)分(fen)析(xi)區(qu)(qu)(qu)四個(ge)(ge)單獨(du)的(de)(de)(de)(de)工(gong)作(zuo)區(qu)(qu)(qu)域，這是最常用(yong)(yong)的(de)(de)(de)(de)分(fen)區(qu)(qu)(qu)方式(shi)。樣品(pin)需(xu)要粉碎(sui)處理(li)的(de)(de)(de)(de)，還需(xu)增(zeng)(zeng)設樣品(pin)粉碎(sui)區(qu)(qu)(qu)。若使用(yong)(yong)實時熒光PCR法(fa)：基(ji)因擴(kuo)(kuo)(kuo)增(zeng)(zeng)區(qu)(qu)(qu)、基(ji)因產(chan)物(wu)分(fen)析(xi)區(qu)(qu)(qu)可以合(he)并(bing)在(zai)一個(ge)(ge)房間內；采用(yong)(yong)標(biao)本處理(li)、核酸提取及擴(kuo)(kuo)(kuo)增(zeng)(zeng)檢測為(wei)一體的(de)(de)(de)(de)全自動化(hua)PCR分(fen)析(xi)儀，則標(biao)本制備(bei)區(qu)(qu)(qu)、擴(kuo)(kuo)(kuo)增(zeng)(zeng)區(qu)(qu)(qu)、擴(kuo)(kuo)(kuo)增(zeng)(zeng)產(chan)物(wu)分(fen)析(xi)區(qu)(qu)(qu)可合(he)并(bing)為(wei)一個(ge)(ge)區(qu)(qu)(qu)域，因此PCR實驗(yan)室原則上設置(zhi)五(wu)個(ge)(ge)區(qu)(qu)(qu)或四個(ge)(ge)區(qu)(qu)(qu)或三個(ge)(ge)區(qu)(qu)(qu)或二個(ge)(ge)單獨(du)的(de)(de)(de)(de)工(gong)作(zuo)區(qu)(qu)(qu)。
一(yi)、核酸擴增前(qian)區和核酸擴增后(hou)區可設在一(yi)個房間內，但必須在滿足下列要求(qiu)的前(qian)提下：
1、核酸(suan)擴增前區實驗室內(nei)設置兩個不同位(wei)置的(de)實驗區，試劑配置在超(chao)凈工作臺(tai)中操作，樣品處理在生物(wu)安全(quan)柜(ju)內(nei)操作。
2、在(zai)核(he)酸擴(kuo)增后(hou)區使用全封閉的擴(kuo)增和檢測系統(tong)，如實(shi)時熒(ying)光PCR儀等。
3、每(mei)個實驗人(ren)員(yuan)使用各自的試(shi)劑、耗材、移液器和(he)盛(sheng)放污染物的盛(sheng)器。
4、在實(shi)驗(yan)前后對(dui)操作區域(yu)和共享(xiang)器(qi)具進行清潔及(ji)消毒。
5、各(ge)區域的試劑、器具、儀器和設備為該區專用，不得交叉使用。
二、空氣流與壓差要求
PCR實(shi)驗室的(de)空(kong)(kong)(kong)氣(qi)流向必(bi)須(xu)嚴(yan)格(ge)按照試劑儲存(cun)和準備區(qu)→標本制備區(qu)→擴增區(qu)→擴增產(chan)(chan)物分析(xi)區(qu)空(kong)(kong)(kong)氣(qi)壓力逐漸遞減方式進行，防止擴增產(chan)(chan)物順空(kong)(kong)(kong)氣(qi)氣(qi)流進入(ru)擴增前的(de)區(qu)域(yu)。風速流向不(bu)得混亂。
為(wei)了保證房(fang)間內的壓差和(he)避免(mian)污染，應(ying)在空調面板(ban)處寫清楚送風(feng)機(ji)和(he)排(pai)風(feng)機(ji)的開(kai)啟順(shun)序(xu)和(he)關閉順(shun)序(xu)，先(xian)后順(shun)序(xu)不得混亂。
空(kong)氣潔凈(jing)級別不同的(de)相鄰房間(jian)之間(jian)的(de)靜壓差(cha)應大于5帕，潔凈(jing)室(shi)(區)與室(shi)外(wai)大氣的(de)靜壓差(cha)應大于10帕，應配備監(jian)測靜壓差(cha)的(de)設備，并定期監(jian)控。
一(yi)般情況下，試(shi)劑(ji)配(pei)制室及(ji)樣品(pin)處理室宜(yi)呈微正壓，以(yi)防外界含(han)核(he)(he)酸氣(qi)溶(rong)膠的(de)空(kong)氣(qi)進入，造成(cheng)污染；可(ke)以(yi)通(tong)過(guo)控(kong)(kong)制進風(feng)(feng)(feng)風(feng)(feng)(feng)量(liang)大(da)于排風(feng)(feng)(feng)風(feng)(feng)(feng)量(liang)達(da)到正壓效果。核(he)(he)酸擴(kuo)增(zeng)室及(ji)產物分析室應呈微負壓，以(yi)防含(han)核(he)(he)酸的(de)氣(qi)溶(rong)膠擴(kuo)散出去(qu)污染試(shi)劑(ji)與樣品(pin)，可(ke)以(yi)通(tong)過(guo)控(kong)(kong)制排風(feng)(feng)(feng)風(feng)(feng)(feng)量(liang)大(da)于進風(feng)(feng)(feng)風(feng)(feng)(feng)量(liang)達(da)到負壓效果。在(zai)理想情況下，PCR實(shi)驗室緩沖間內(nei)，可(ke)設(she)置正壓，使(shi)室內(nei)空(kong)氣(qi)不流(liu)向室外，室外空(kong)氣(qi)不流(liu)向室內(nei)。 PCR實(shi)驗室進風(feng)(feng)(feng)由原有中(zhong)央空(kong)調控(kong)(kong)制的(de)要(yao)求將中(zhong)央空(kong)調風(feng)(feng)(feng)口安裝到指定定點。
三、實驗室面積及設備間距
一(yi)般來說各房間的面積(ji)沒(mei)有嚴格要求，只需能(neng)放置所需儀器(qi)設備，并(bing)(bing)且(qie)便(bian)于人(ren)員操作(zuo)即可，但是有生(sheng)物(wu)安全柜的房間面積(ji)不能(neng)小于10平米，并(bing)(bing)且(qie)每增(zeng)加一(yi)臺生(sheng)物(wu)安全柜，房間就要增(zeng)加10平米。
各實驗室緩沖間(jian)的(de)面(mian)積(ji)一般為(wei)1300*（1300或(huo)1500）mm為(wei)宜，并且緩沖間(jian)的(de)面(mian)積(ji)不能大于實驗室房間(jian)面(mian)積(ji)的(de)1/8。
在做平面設(she)計的時候(hou)，首先要(yao)(yao)考慮的因素(su)是(shi)就是(shi)“安(an)全(quan)”，實(shi)驗室是(shi)最易發生(sheng)爆炸、火災、毒氣(qi)泄(xie)露等的場所(suo)。我(wo)們在做平面設(she)計的時候(hou)，應盡(jin)量地要(yao)(yao)保持(chi)實(shi)驗室的通風流暢(chang)、逃生(sheng)通道暢(chang)通。根(gen)據(ju)國際人體(ti)工程學(xue)的標準(zhun)。我(wo)們做如下的劃分以供(gong)參照：
實驗臺與實驗臺通道劃分標準(通道間隔用L表示)
L>500mm時，一邊可站人操作；
L>800mm時，一邊可坐人操作；
L>1200mm時，一邊可坐人，一邊可站人，中間不可過人;
L>1500mm時，兩邊可坐人，中間可過人；
L>1800mm時，兩邊可坐人，中間可過(guo)人可過(guo)儀(yi)器(qi)
天平臺(tai)、儀器臺(tai)不宜離墻(qiang)太近，離墻(qiang)400mm為(wei)(wei)(wei)宜。為(wei)(wei)(wei)了在(zai)工作發生危險時易于(yu)疏散(san)，實驗(yan)臺(tai)間(jian)的(de)過道應全部通向走(zou)廊(lang)。另:實驗(yan)室建筑層(ceng)高宜為(wei)(wei)(wei)3.7米(mi)(mi)(mi)-4.0米(mi)(mi)(mi)為(wei)(wei)(wei)宜，凈高宜為(wei)(wei)(wei)2.7米(mi)(mi)(mi)-2.8米(mi)(mi)(mi)，有潔凈度、壓力梯度、恒(heng)溫恒(heng)濕等特殊要(yao)求的(de)實驗(yan)室凈高宜為(wei)(wei)(wei)2.5米(mi)(mi)(mi)-2.7米(mi)(mi)(mi)（不包括吊(diao)頂）；實驗(yan)室走(zou)廊(lang)凈寬(kuan)(kuan)宜為(wei)(wei)(wei)2.5米(mi)(mi)(mi)-3.0米(mi)(mi)(mi).普(pu)通實驗(yan)室雙門寬(kuan)(kuan)以1.1米(mi)(mi)(mi)-1.5米(mi)(mi)(mi)(不對(dui)稱對(dui)開(kai)門)為(wei)(wei)(wei)宜,單門寬(kuan)(kuan)以0.8米(mi)(mi)(mi)-0.9米(mi)(mi)(mi)為(wei)(wei)(wei)宜。
四、潔凈裝修要求
1、潔(jie)凈室(shi)（區(qu)）的(de)內表面應平(ping)整光滑、無裂縫(feng)、接口嚴(yan)密(mi)、無顆(ke)粒(li)物脫落，并能(neng)耐(nai)受清(qing)(qing)洗和消毒，墻壁與地面的(de)交界處(chu)宜成弧形或采取其他措施，以減少灰塵積聚和便于清(qing)(qing)潔(jie)。
2、潔凈室(區)內各種管道、燈(deng)具、風口以及其他(ta)公用設(she)施，在(zai)設(she)計和(he)安裝時應(ying)考慮使用中避免出現(xian)不易清潔的部位。
3、潔凈室(shi)(區)的窗戶(hu)、天(tian)棚及進入室(shi)內(nei)的管道(dao)、風(feng)口、燈(deng)具(ju)與(yu)墻壁(bi)或天(tian)棚的連接部(bu)位(wei)均應(ying)密封(feng)。
五、工作服要求
在凈化車間內工(gong)(gong)作(zuo)(zuo)的(de)人員應(ying)穿(chuan)著符合要求(qiu)的(de)工(gong)(gong)作(zuo)(zuo)服。工(gong)(gong)作(zuo)(zuo)服的(de)選材、式樣及穿(chuan)戴方式應(ying)與生產操作(zuo)(zuo)和空氣(qi)潔凈度(du)級(ji)別要求(qiu)相適應(ying)，并不(bu)得混用。潔凈工(gong)(gong)作(zuo)(zuo)服的(de)質地應(ying)光(guang)滑、不(bu)產生靜電(dian)、不(bu)脫落纖維和顆(ke)粒(li)性物質。無菌(jun)工(gong)(gong)作(zuo)(zuo)服必須(xu)包(bao)蓋全部(bu)毛發、胡須(xu)及腳部(bu)，并能阻留人體脫落物。不(bu)同空氣(qi)潔凈度(du)級(ji)別使用的(de)工(gong)(gong)作(zuo)(zuo)服應(ying)當分別清洗、整(zheng)理，必要時消毒或滅(mie)菌(jun)。工(gong)(gong)作(zuo)(zuo)服洗滌、滅(mie)菌(jun)時不(bu)應(ying)帶入(ru)附加(jia)的(de)顆(ke)粒(li)物質。工(gong)(gong)作(zuo)(zuo)服應(ying)制定清洗周(zhou)期。
進(jin)入(ru)各個區域必須嚴(yan)格按(an)照單一方向進(jin)行，不(bu)(bu)同的工(gong)(gong)作(zuo)區域使用不(bu)(bu)同的工(gong)(gong)作(zuo)服（例(li)如不(bu)(bu)同的顏色）。工(gong)(gong)作(zuo)人(ren)員離開(kai)時(shi)，不(bu)(bu)得(de)將工(gong)(gong)作(zuo)服帶出(chu)。
實驗室應建立、執行人(ren)員進出潔(jie)凈(jing)區的清潔(jie)程序(xu)和管理制度，人(ren)員清潔(jie)程序(xu)合理。
六、人流路徑與物流路徑
進入實(shi)驗(yan)室區域工作人員應該按(an)照(zhao)以下(xia)路徑：
公(gong)共清潔區(qu)——更衣間（更換潔凈(jing)服）——緩沖間——污染實驗(yan)區(qu)
工(gong)作(zuo)人員(yuan)退(tui)出(chu)實驗(yan)室的路(lu)徑為(wei)：
污染試驗區(qu)——緩沖(chong)間——淋浴間（有條件的可(ke)設置）——更(geng)衣間——公共清潔區(qu)
所(suo)有的(de)物品進入(ru)實(shi)驗(yan)區必(bi)須經過雙扉互鎖傳(chuan)遞窗，利用傳(chuan)遞窗消毒后(hou)才可(ke)進入(ru)，實(shi)驗(yan)室內所(suo)有物品的(de)也(ye)必(bi)須經過傳(chuan)遞窗才可(ke)以傳(chuan)遞到實(shi)驗(yan)室以外的(de)清潔公共區。
七、門的開啟方向
實驗(yan)(yan)室(shi)建筑層高(gao)宜(yi)(yi)為(wei)3.7米(mi)(mi)(mi)(mi)-4.0米(mi)(mi)(mi)(mi)為(wei)宜(yi)(yi)，PCR實驗(yan)(yan)室(shi)凈高(gao)宜(yi)(yi)為(wei)2.5米(mi)(mi)(mi)(mi)-2.7米(mi)(mi)(mi)(mi)（不包括吊(diao)頂）。實驗(yan)(yan)室(shi)走廊(lang)凈寬宜(yi)(yi)為(wei)2.5米(mi)(mi)(mi)(mi)-3.0米(mi)(mi)(mi)(mi)。普通實驗(yan)(yan)室(shi)雙門寬以(yi)1.1米(mi)(mi)(mi)(mi)-1.5米(mi)(mi)(mi)(mi)(不對(dui)稱對(dui)開門)為(wei)宜(yi)(yi),單門寬以(yi)0.8米(mi)(mi)(mi)(mi)-0.9米(mi)(mi)(mi)(mi)為(wei)宜(yi)(yi)。
一(yi)般實驗室門(men)主要(yao)向(xiang)里開，但(dan)如有危(wei)險的房間(jian)，房門(men)應朝(chao)外開，房門(men)材質最好選擇壓(ya)力玻璃。有壓(ya)差梯度(du)的房間(jian)，門(men)的開啟(qi)(qi)方(fang)向(xiang)應朝(chao)向(xiang)正壓(ya)方(fang)向(xiang)一(yi)側開啟(qi)(qi)；考慮到消(xiao)防安全，對于那些主要(yao)逃(tao)生(sheng)門(men)的開啟(qi)(qi)方(fang)向(xiang)應朝(chao)向(xiang)清(qing)潔區方(fang)向(xiang)開啟(qi)(qi)。
八、基本儀器設備考慮
1、試(shi)劑貯存(cun)和(he)準(zhun)備區(qu)
該實(shi)驗區(qu)主要進行(xing)的(de)操作(zuo)為貯(zhu)存(cun)試(shi)劑(ji)(ji)的(de)制備、試(shi)劑(ji)(ji)的(de)分裝和主反(fan)應混合(he)液的(de)制備。試(shi)劑(ji)(ji)和用于(yu)樣品制作(zuo)的(de)材料應直接運送至該區(qu)，不得經過其它區(qu)域。試(shi)劑(ji)(ji)原材料必(bi)須貯(zhu)存(cun)在本(ben)(ben)區(qu)內，并(bing)在本(ben)(ben)區(qu)內制備成所需的(de)貯(zhu)存(cun)試(shi)劑(ji)(ji)。對(dui)(dui)與氣流壓(ya)力的(de)控制，本(ben)(ben)區(qu)應對(dui)(dui)外界保持微(wei)正壓(ya)。
試(shi)劑(ji)準備區儀器(qi)設備主要應有(you)加(jia)樣器(qi)、冰箱(xiang)、天平、低速離心機、混勻器(qi)、可移動紫(zi)外燈(deng)等(deng)。可使用(yong)超凈(jing)工作臺作為試(shi)劑(ji)配制操作臺面。
2、標本制備區
該區域主要進行的操作為樣本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴增反應管和測定DNA的合成。本區的壓力梯度要求為：相對于鄰近區域為正壓，以避免從鄰近區進入本區的氣溶膠污染。另外，由于在加樣操作中可能會發生氣溶膠所致的污染，所以應避免在本區內不必要的走動。
標(biao)本制備(bei)(bei)區(qu)儀(yi)器設備(bei)(bei)主(zhu)要應有生物安全柜（最好為B2，可避(bi)免提取核酸(suan)在(zai)柜內反(fan)復循環，造成(cheng)標(biao)本間交叉“污染”，出現假陽(yang)性結果。此(ci)外還應配備(bei)(bei)加樣器、臺(tai)式高速離(li)心機（冷(leng)凍及常溫(wen)）、臺(tai)式低速離(li)心機、恒(heng)溫(wen)設備(bei)(bei)（水浴和/或干浴儀(yi)）、冰箱、混勻器和可移動紫(zi)外燈等。
3、擴(kuo)增(zeng)和擴(kuo)增(zeng)產物(wu)分析區
該區(qu)(qu)域(yu)主要(yao)進(jin)行的(de)操(cao)作為DNA擴增和擴增片段(duan)的(de)測定。此外，已制(zhi)備(bei)的(de)DNA模板(ban)(來自樣(yang)本(ben)(ben)(ben)制(zhi)備(bei)區(qu)(qu))的(de)加(jia)入和主反(fan)應(ying)混合液(來自試劑貯存(cun)和制(zhi)備(bei)區(qu)(qu))制(zhi)備(bei)成反(fan)應(ying)混合液等也可在(zai)本(ben)(ben)(ben)區(qu)(qu)內進(jin)行。本(ben)(ben)(ben)區(qu)(qu)的(de)壓(ya)力梯度要(yao)求為：相對(dui)于(yu)鄰(lin)近(jin)區(qu)(qu)域(yu)為負壓(ya)，以避(bi)免(mian)氣(qi)溶膠從(cong)本(ben)(ben)(ben)區(qu)(qu)漏出。為避(bi)免(mian)氣(qi)溶膠所致的(de)污染，應(ying)盡量減少在(zai)本(ben)(ben)(ben)區(qu)(qu)內的(de)不(bu)必(bi)要(yao)的(de)走動。個別操(cao)作如(ru)加(jia)樣(yang)等應(ying)在(zai)超凈臺(tai)內進(jin)行。
擴增(zeng)區主(zhu)要(yao)儀(yi)器就(jiu)是核酸擴增(zeng)熱(re)循(xun)環(huan)儀(yi)（PCR儀(yi)，實時熒光或普通的）。熱(re)循(xun)環(huan)儀(yi)的電源應專(zhuan)用，并(bing)配備一(yi)個穩壓電源或UPS，以(yi)防止由(you)于(yu)電壓的波(bo)動對擴增(zeng)測定的影(ying)響。此外(wai)，根(gen)據工作需要(yao)，還可(ke)配備加樣器、超凈(jing)臺等。
產物分析區：本區所使用的儀器設(she)備可能(neng)有加樣器、電(dian)泳儀（槽）、電(dian)轉(zhuan)印(yin)儀、雜交爐或雜交箱、水浴箱、DNA測序儀、酶(mei)標儀和洗板機等。
