1 、PCR實驗室平面布局

PCR擴(kuo)(kuo)(kuo)(kuo)增(zeng)檢驗(yan)實(shi)驗(yan)室原則上分為(wei)(wei)四(si)個單獨(du)的工(gong)(gong)作區(qu)域：試(shi)劑貯(zhu)存(cun)和準備(bei)區(qu)、標本(ben)制備(bei)區(qu)、擴(kuo)(kuo)(kuo)(kuo)增(zeng)反(fan)應(ying)混(hun)(hun)合(he)物配(pei)制和擴(kuo)(kuo)(kuo)(kuo)增(zeng)區(qu)、擴(kuo)(kuo)(kuo)(kuo)增(zeng)產物分析區(qu)。為(wei)(wei)避免交叉污染，進(jin)入各個工(gong)(gong)作區(qu)域必(bi)須(xu)嚴格遵循(xun)單一方向進(jin)行(xing)，即只能從試(shi)劑貯(zhu)存(cun)和準備(bei)區(qu)→標本(ben)制備(bei)區(qu)→擴(kuo)(kuo)(kuo)(kuo)增(zeng)反(fan)應(ying)混(hun)(hun)合(he)物配(pei)制和擴(kuo)(kuo)(kuo)(kuo)增(zeng)區(qu)→擴(kuo)(kuo)(kuo)(kuo)增(zeng)產物分析區(qu)。 各實(shi)驗(yan)區(qu)之(zhi)間的試(shi)劑及樣(yang)品傳遞(di)應(ying)通過(guo)傳遞(di)窗進(jin)行(xing)。

2、實驗室空調通風系統設計及壓力控制

PCR實(shi)驗(yan)(yan)室(shi)并(bing)沒有嚴格的凈化要(yao)求，但(dan)是為(wei)避免各個實(shi)驗(yan)(yan)區(qu)域間交叉(cha)污(wu)染(ran)的可能性，宜采(cai)用全送全排(pai)的氣流組織形式。同(tong)時，要(yao)嚴格控制(zhi)送、排(pai)風的比例以保證各實(shi)驗(yan)(yan)區(qu)的壓力要(yao)求。

2.1、試劑(ji)貯存和(he)準備區

該實驗區主(zhu)(zhu)要進行的(de)(de)(de)(de)操作為貯存(cun)試(shi)劑的(de)(de)(de)(de)制(zhi)備、試(shi)劑的(de)(de)(de)(de)分裝和主(zhu)(zhu)反(fan)應(ying)混合液(ye)的(de)(de)(de)(de)制(zhi)備。試(shi)劑和用(yong)于(yu)樣品制(zhi)作的(de)(de)(de)(de)材料應(ying)直接(jie)運送至(zhi)該區，不得經過其他區域。試(shi)劑原材料必須貯存(cun)在(zai)(zai)本(ben)區內，并(bing)在(zai)(zai)本(ben)區內制(zhi)備成所需的(de)(de)(de)(de)貯存(cun)試(shi)劑。 對與(yu)氣流壓力的(de)(de)(de)(de)控制(zhi)，本(ben)區并(bing)沒有(you)嚴(yan)格(ge)的(de)(de)(de)(de)要求。

2.2、標本制備區

該區(qu)(qu)域主要(yao)(yao)進行的(de)操作為樣(yang)本的(de)保存(cun)、核酸(RNA、DNA)提取、貯存(cun)及(ji)其加入至擴增反(fan)應(ying)管和測定DNA的(de)合成(cheng)。 本區(qu)(qu)的(de)壓(ya)力梯度要(yao)(yao)求為：相對于鄰近區(qu)(qu)域為正壓(ya)，以避免從鄰近區(qu)(qu)進入本區(qu)(qu)的(de)氣溶膠(jiao)污染。另外，由(you)于在(zai)加樣(yang)操作中可能會發生氣溶膠(jiao)所致的(de)污染，所以應(ying)避免在(zai)本區(qu)(qu)內不必要(yao)(yao)的(de)走動。

2.3、擴(kuo)增反(fan)應混(hun)合(he)物配制(zhi)和擴(kuo)增區

該區(qu)(qu)域主(zhu)要(yao)(yao)進行(xing)的(de)(de)(de)操作(zuo)為DNA擴增。此(ci)外，已(yi)制備(bei)的(de)(de)(de)DNA模板 (來自(zi)樣本(ben)制備(bei)區(qu)(qu))的(de)(de)(de)加(jia)入和主(zhu)反應(ying)(ying)混合液(ye)(來自(zi)試(shi)劑貯存和制備(bei)區(qu)(qu))制備(bei)成(cheng)反應(ying)(ying)混合液(ye)等也可在本(ben)區(qu)(qu)內進行(xing)。 本(ben)區(qu)(qu)的(de)(de)(de)壓力(li)梯度要(yao)(yao)求(qiu)為：相(xiang)對于鄰近區(qu)(qu)域為負(fu)壓，以避免(mian)氣溶(rong)膠(jiao)從(cong)本(ben)區(qu)(qu)漏出。為避免(mian)氣溶(rong)膠(jiao)所致的(de)(de)(de)污染(ran)，應(ying)(ying)盡量減少(shao)在本(ben)區(qu)(qu)內的(de)(de)(de)不必(bi)要(yao)(yao)的(de)(de)(de)走動。個別操作(zuo)如加(jia)樣等應(ying)(ying)在超凈臺(tai)內進行(xing)。

2.4、擴增產(chan)物分析區

該區(qu)域主要進行的(de)操作為擴(kuo)增片段的(de)測定。 本(ben)(ben)區(qu)是最主要的(de)擴(kuo)增產物污染來源(yuan)，因此對本(ben)(ben)區(qu)的(de)壓(ya)力(li)梯度的(de)要求為：相對于鄰(lin)近區(qu)域為負壓(ya)，以避免擴(kuo)增產物從(cong)本(ben)(ben)區(qu)擴(kuo)散至其它區(qu)域。

3、污染的預防與控制

PCR實驗室設計的(de)核心問題是如何避免(mian)污(wu)(wu)(wu)染(ran)(ran)(ran)。在(zai)實(shi)際工作中(zhong)，常見(jian)的(de)有(you)以(yi)(yi)下幾種污(wu)(wu)(wu)染(ran)(ran)(ran)類(lei)型：擴增產物的(de)污(wu)(wu)(wu)染(ran)(ran)(ran)；天然基因組DNA的(de)污(wu)(wu)(wu)染(ran)(ran)(ran)；試劑的(de)污(wu)(wu)(wu)染(ran)(ran)(ran)以(yi)(yi)及標本(ben)間的(de)污(wu)(wu)(wu)染(ran)(ran)(ran)。由于一旦(dan)發生(sheng)污(wu)(wu)(wu)染(ran)(ran)(ran)，實(shi)驗(yan)就必須停止，直(zhi)到找(zhao)到污(wu)(wu)(wu)染(ran)(ran)(ran)源為止，而且實(shi)驗(yan)結果必須作廢(fei)，需重新進行實(shi)驗(yan)。所以(yi)(yi)發生(sheng)污(wu)(wu)(wu)染(ran)(ran)(ran)后再圍繞實(shi)驗(yan)室來尋找(zhao)污(wu)(wu)(wu)染(ran)(ran)(ran)源不但耗(hao)時而且繁瑣，浪費人力物力。因此要避免(mian)污(wu)(wu)(wu)染(ran)(ran)(ran)，首先(xian)應(ying)是預防(fang)，而不是排(pai)除。

3.1、工作區域的嚴(yan)格劃分

（1）各個(ge)實驗區域設置合理；

（2）各個實(shi)驗(yan)區域要有明(ming)顯(xian)的(de)(de)標記（如醒目的(de)(de)門牌或不同的(de)(de)地面顏色等），以避免(mian)各個不同實(shi)驗(yan)區域設備物(wu)品、試(shi)劑等發生混淆。

3.2、合(he)理的系統設置

（1）合理的空(kong)調(diao)通風系統設置，盡量采(cai)用全(quan)送全(quan)排的空(kong)調(diao)系統；

（2）嚴格的(de)(de)氣(qi)流壓力控制，保證不同(tong)的(de)(de)實驗區內(nei)不同(tong)的(de)(de)壓力要求。

3.3、 規范的操作

（1）擴增檢驗(yan)實驗(yan)室的技術人(ren)員(yuan)必須進(jin)行上崗培(pei)訓(xun)，經培(pei)訓(xun)合格后才能從事(shi)臨床基因擴增檢驗(yan)的工作；

（2）在實(shi)驗(yan)操(cao)(cao)作過程中，操(cao)(cao)作者(zhe)必(bi)須戴(dai)手套(tao)，并(bing)經(jing)常更換。此外，操(cao)(cao)作中使用一次性帽子也(ye)是一個有效地防止(zhi)污染(ran)的措施；

（3）清(qing)潔工作及(ji)時(shi)、正確(que)。實(shi)驗(yan)工作結束后，必(bi)須立(li)即(ji)對本區進(jin)行(xing)清(qing)潔。除(chu)常規的消毒液體對表(biao)面進(jin)行(xing)擦拭消毒或紫外線燈的照(zhao)射消毒外，對一些實(shi)驗(yan)設備還(huan)應進(jin)行(xing)高(gao)壓消毒處理。

3.4、嚴格的管理

（1）嚴格控(kong)制(zhi)進(jin)出實驗室的人(ren)員。與實驗無(wu)關的人(ren)員不(bu)得隨(sui)意進(jin)出實驗室，有條件的情況下要設置獨立的通道(dao)和進(jin)出整個(ge)實驗區的門；

（2）盡量(liang)減少在實(shi)驗(yan)區(qu)內不必要的走動以減少交(jiao)叉污染的可能性。

（3）擴增產物分析區(qu)是最主要的(de)擴增產物污染來源，廢(fei)液(ye)不(bu)能(neng)在實驗(yan)室中傾倒(dao)，必須經(jing)(jing)消毒液(ye)浸泡消毒后在遠離實驗(yan)室的(de)地方棄掉，用過的(de)吸頭等(deng)一次性材料(liao)也應經(jing)(jing)消毒液(ye)浸泡消毒后統一處理(li)，如(ru)焚燒等(deng)；

（4）擴增產物(wu)分(fen)析(xi)區可能會用到(dao)某些可致基因突(tu)變(bian)和(he)有(you)毒物(wu)質，應特別(bie)注意實驗人員的安(an)全防護(hu)。

3.5、完(wan)備的實驗室(shi)配(pei)套設施(shi)

完備(bei)的(de)實驗(yan)室(shi)配套(tao)設施是(shi)保證(zheng)實驗(yan)工作(zuo)的(de)必要條(tiao)件，應根據各(ge)個實驗(yan)室(shi)實驗(yan)內容的(de)不同配備(bei)相應的(de)設備(bei)和(he)儀器(qi)，如超凈工作(zuo)臺、離(li)心機、加樣(yang)器(qi)等