聚合酶鏈鎖反(fan)應，Polymerase chain reaction，簡稱PCR，是(shi)一種(zhong)分子生(sheng)(sheng)物學技術(shu)(shu)，用于(yu)擴增特定(ding)的(de)DNA片段，這種(zhong)方法可(ke)在生(sheng)(sheng)物體(ti)外(wai)進行(xing)，不(bu)必依賴大腸桿菌(jun)或酵(jiao)母菌(jun)等生(sheng)(sheng)物體(ti)。PCR這項(xiang)技術(shu)(shu)，被廣泛地運用在醫(yi)學和生(sheng)(sheng)物學的(de)實驗室，例如用于(yu)判斷檢體(ti)中是(shi)否(fou)會表現(xian) 某(mou)遺(yi)傳疾病的(de)圖譜、傳染病的(de)診斷、基因復制，以及親子鑒(jian)定(ding)。
PCR實驗室平面布局
PCR實(shi)(shi)驗(yan)(yan)室(shi)原則上分為(wei)(wei)4個(ge)(ge)單獨(du)(du)的(de)工(gong)(gong)作(zuo)區(qu)(qu)(qu)域，由(you)擴(kuo)增(zeng)(zeng)前區(qu)(qu)(qu)到擴(kuo)增(zeng)(zeng)后區(qu)(qu)(qu)，且(qie)要嚴格分開。實(shi)(shi)驗(yan)(yan)材料(liao)、試劑(ji)、記(ji)錄筆、紙、清潔(jie)材料(liao)等，只能從擴(kuo)增(zeng)(zeng)前區(qu)(qu)(qu)流(liu)向擴(kuo)增(zeng)(zeng)后區(qu)(qu)(qu)，即從試劑(ji)制備區(qu)(qu)(qu)–樣品制備區(qu)(qu)(qu)—擴(kuo)增(zeng)(zeng)區(qu)(qu)(qu)—擴(kuo)增(zeng)(zeng)產物分析區(qu)(qu)(qu)，不(bu)得逆向流(liu)動。實(shi)(shi)驗(yan)(yan)室(shi)的(de)氣流(liu)也應(ying)從擴(kuo)增(zeng)(zeng)前區(qu)(qu)(qu)流(liu)動到擴(kuo)增(zeng)(zeng)后區(qu)(qu)(qu)，不(bu)得逆向流(liu)動。各工(gong)(gong)作(zuo)區(qu)(qu)(qu)域應(ying)設置緩沖間，工(gong)(gong)作(zuo)間與緩沖間之(zhi)間宜安(an)裝聯鎖裝置。不(bu)同功能的(de)核酸檢驗(yan)(yan)工(gong)(gong)作(zuo)區(qu)(qu)(qu)應(ying)是(shi)分隔獨(du)(du)立的(de)工(gong)(gong)作(zuo)室(shi)，并有明顯的(de)標志，各區(qu)(qu)(qu)間不(bu)能直通(tong)。各區(qu)(qu)(qu)之(zhi)間如果是(shi)緊密相連，需(xu)安(an)裝物品 傳遞窗(chuang)。每個(ge)(ge)工(gong)(gong)作(zuo)區(qu)(qu)(qu)域的(de)頂部應(ying)安(an)裝紫外(wai)燈，紫外(wai)燈的(de)波長為(wei)(wei)254nm。
實驗(yan)室較為理想的(de)布局模(mo)式為有一個(ge)專用走廊，試(shi)劑制備(bei)區(qu)(qu)，樣品制備(bei)區(qu)(qu)，擴增區(qu)(qu)和產物分析區(qu)(qu)很規范的(de)排(pai)列在一起。內(nei)實驗(yan)室區(qu)(qu)域(yu)設為正壓(ya)或常壓(ya)狀態(tai)，緩沖(chong)間(jian)內(nei)設為負(fu)壓(ya)狀態(tai)，使這三個(ge)區(qu)(qu)的(de)空氣流向(xiang)由實驗(yan)區(qu)(qu)域(yu)內(nei)向(xiang)外，緩沖(chong)間(jian)內(nei)通(tong)向(xiang)內(nei)實驗(yan)室和走廊的(de)門可(ke)安一種聯鎖裝置，當一個(ge)門打(da)(da)開時(shi)，另一門必須關閉狀態(tai)，防止出現兩(liang)個(ge)門同時(shi)打(da)(da)開的(de)情況(kuang)。
?PCR實驗室各區的功能及主要設備
1.試劑制備區主(zhu)要(yao)是(shi)擴增試劑的配制，分裝盒保存(cun)。主(zhu)要(yao)設(she)備有天平、冰箱、離心機、加樣器(qi)、紫外燈(deng)。
2.樣(yang)品制(zhi)(zhi)備(bei)(bei)區主(zhu)要是樣(yang)品的(de)混(hun)樣(yang)和測試(shi)樣(yang)品的(de)制(zhi)(zhi)備(bei)(bei)。主(zhu)要設備(bei)(bei)有(you)冰箱(xiang)、生(sheng)物安全柜(ju)、離心(xin)機(ji)、加樣(yang)器(qi)、振蕩器(qi)、恒溫水(shui)浴、上下(xia)水(shui)設備(bei)(bei)、廢棄物容器(qi)、紫外燈。根據制(zhi)(zhi)備(bei)(bei)樣(yang)品的(de)性質和要求(qiu)決定操作臺(tai)是用生(sheng)物安全柜(ju)、凈(jing)化工作臺(tai)、還(huan)是排毒柜(ju)，如疾控(kong)中心(xin)、臨床醫學(xue)實驗室一般選用生(sheng)物安全柜(ju)，植(zhi)物轉基(ji)因、檢疫等可選排毒柜(ju)。
3.擴(kuo)(kuo)增(zeng)區(qu)是(shi)pcr擴(kuo)(kuo)增(zeng)反(fan)應體系(xi)的配制和模(mo)板(ban)的加入，核酸擴(kuo)(kuo)增(zeng)。加樣(yang)應在生(sheng)物(wu)安全(quan)柜（超凈(jing)工作臺）內(nei)進行，超凈(jing)工作臺的氣流方向宜選擇垂(chui)直(zhi)式。核酸擴(kuo)(kuo)增(zeng)設備為冰箱(xiang)、生(sheng)物(wu)安全(quan)柜、離心機加樣(yang)器(qi)、廢棄物(wu)容(rong)器(qi)、紫外燈。
4.擴(kuo)(kuo)增產物分析區是擴(kuo)(kuo)增產物的測(ce)(ce)定。若實驗僅采用(yong)全自動擴(kuo)(kuo)增檢測(ce)(ce)儀，可將 區與擴(kuo)(kuo)增產物分析區合并(bing)為(wei)一(yi)個區。本區所使(shi)用(yong)的儀器設備有(you)酶標儀、洗板機、加(jia)樣(yang)器和水浴箱等。
?PCR實驗室空調通風系統設計及壓力控制
各個區域(yu)之間(jian)應具備單(dan)向的實(shi)驗工(gong)藝(yi)流(liu)(liu)(liu)、物流(liu)(liu)(liu)、人流(liu)(liu)(liu)與氣(qi)流(liu)(liu)(liu)，形成單(dan)向流(liu)(liu)(liu)程的保(bao)護屏障，避免實(shi)驗室之間(jian)的相互干擾，防止(zhi)核酸氣(qi)溶膠對實(shi)驗過(guo)程造(zao)成污染產(chan)生(sheng)假性(xing)(xing)結果。PCR實(shi)驗室并沒有嚴格(ge)的凈化(hua)要求，但是為了避免各個實(shi)驗區域(yu)間(jian)交(jiao)叉污染的可能性(xing)(xing)，宜采用全送排的氣(qi)流(liu)(liu)(liu)組織形式。
實驗室(shi)的墻(qiang)體，包括(kuo)頂棚，應結(jie)構牢固、氣密性(xing)好；所有(you)陰角宜(yi)采(cai)用(yong)弧(hu)形(xing)線(xian)條過(guo)濾；墻(qiang)體內壁(bi)光(guang)潔(jie)、不吸(xi)附、耐(nai)腐(fu)蝕、易清洗消毒；地(di)面材(cai)料應滿足無(wu)縫(feng)隙、無(wu)滲漏、光(guang)潔(jie)、耐(nai)腐(fu)蝕的要求(qiu)。地(di)面建(jian)議使用(yong)PVC卷材(cai)地(di)面或自流平地(di)面，整(zheng)體性(xing)好，便于進行清掃(sao)，耐(nai)腐(fu)蝕。
