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PCR實驗室凈化系統設計技術要求

PCR實驗室又叫基(ji)因擴(kuo)增實驗室(shi)。PCR是聚合酶鏈式反(fan)應(Polymerase Chain Reaction)的簡稱。是一種分子生物學(xue)技術,用于放大特(te)定的DNA片段(duan),可看作生物體外的特(te)殊DNA復(fu)制。通過DNA基(ji)因追蹤(zong)系(xi)統,能迅速掌(zhang)握患(huan)者體內的病毒含(han)量,其精確度高達(da)納米級別。

PCR實驗室凈化系統設計技術要求

當前,PCR實驗室廣泛應用于醫院及各疾病預防控制中心的疫病檢驗,2010年,衛生部辦公廳制定并發布了《醫療機構臨床基因擴增檢驗實驗室管理辦法》以及《醫療機構臨床基因擴增檢驗實驗室工作導則》(以下簡稱導則)。導則規定了PCR實驗室設計的基本(ben)原(yuan)(yuan)則,原(yuan)(yuan)則上PCR實(shi)驗室需(xu)設置4個(ge)區(qu)域(yu)∶試(shi)劑(ji)儲存(cun)和準備區(qu)、標本(ben)制備區(qu)、擴增(zeng)區(qu)、產(chan)物分(fen)析區(qu),各(ge)個(ge)分(fen)區(qu)具體(ti)設備配置也各(ge)有不(bu)同。

PCR實驗室設置的4個區域主要設備配置:

試(shi)劑儲存和準備(bei)區:冷(leng)凍冷(leng)藏冰箱、超(chao)凈工作(zuo)臺、臺式離(li)心機、掌上(shang)離(li)心機、微(wei)(wei)孔(kong)板(ban)離(li)心機、可移動紫外燈、混(hun)勻器、田平、微(wei)(wei)量(liang)加樣器等;

標(biao)本制備區(qu):2~8℃冰箱(xiang)、低溫冰箱(xiang)或超低溫冰箱(xiang)、生物(wu)安(an)全柜、高速離心(xin)機、均質(zhi)儀、核酸提取儀、蒸汽滅菌器、超微量紫外分光光度計(ji)、過氧化氫消毒劑、金屬(shu)浴(yu)、水(shui)浴(yu)箱(xiang)等;

擴增區:普通PCR儀(yi)、熒光定量(liang)PCR儀(yi)、數(shu)字PCR儀(yi)、質(zhi)譜儀(yi)、微量(liang)加樣器、低溫冰箱(xiang)、可移(yi)動紫外燈(deng)等;

產物分(fen)析區:凝膠成像系(xi)統、電泳系(xi)統、微量加樣器(qi)、可移動紫(zi)外(wai)燈等。

PCR實驗室四個區域要求:空氣不能直接相通

根據導則要求,PCR 實(shi)驗室各(ge)個區域無論(lun)在空(kong)間上還(huan)是使用中必(bi)須完全獨立,不能有任何空(kong)氣(qi)(qi)的直接相通。空(kong)氣(qi)(qi)流向可按照:試劑儲存(cun)和(he)準備區——標本制備區——擴增區——產物分析區壓(ya)力遞減(jian)的方式進行,防止各(ge)區域空(kong)氣(qi)(qi)的交叉污染。

PCR實驗室設計核心:各區域壓力梯度控制

PCR 反(fan)應的最(zui)大特(te)點(dian)就是(shi)極高(gao)的靈敏性,極其(qi)微量(liang)的污(wu)染(ran)就會造成(cheng) PCR 實驗結果(guo)的假(jia)陽性,因(yin)此(ci)組合(he)型 PCR 實驗室設計的核(he)心(xin)問(wen)題就是(shi)避免交叉污(wu)染(ran),而組合(he)型 PCR 實驗室的平面布局模式及(ji)各區域的壓力(li)梯(ti)度控(kong)制成(cheng)為了解決這一核(he)心(xin)問(wen)題的關(guan)鍵。

PCR實驗室空調系統:嚴格控制送排風比例

現行國(guo)家標準《疾(ji)病預防(fang)控制中心建筑技術規(gui)范》GB 50881 對 PCR 實驗(yan)室的(de)各(ge)項設計參(can)數進(jin)行了規(gui)范與要求,PCR實驗(yan)室各(ge)區域并(bing)(bing)沒有凈化控制要求,但為了避免交(jiao)叉感染(ran),通常采用全(quan)送(song)全(quan)排的(de)直流空調系統,并(bing)(bing)且需要嚴格控制好送(song)風、排風的(de)比例,保證各(ge)實驗(yan)區域的(de)壓力(li)梯度(du)。

PCR實驗室暖通:獨立的全新風

組(zu)合型PCR實(shi)驗(yan)(yan)室(shi)(shi)的(de)空調(diao)負荷(he)、換氣(qi)次數等要求與二級生物安全(quan)實(shi)驗(yan)(yan)室(shi)(shi)原(yuan)則(ze)一(yi)致(zhi)。PCR實(shi)驗(yan)(yan)室(shi)(shi)的(de)暖通空調(diao)系(xi)統(tong)需(xu)設(she)置(zhi)(zhi)獨立的(de)一(yi)套全(quan)新風(feng)空調(diao)系(xi)統(tong),PCR實(shi)驗(yan)(yan)室(shi)(shi)并無空氣(qi)凈化的(de)強制(zhi)性(xing)要求,因此只需(xu)要設(she)置(zhi)(zhi)初效加中效過濾器即(ji)可,不同房(fang)間(jian)的(de)排(pai)風(feng)宜設(she)置(zhi)(zhi)止回裝置(zhi)(zhi),排(pai)風(feng)機吸入側設(she)置(zhi)(zhi)活性(xing)炭等生物凈化裝置(zhi)(zhi)。

PCR緩沖間:雙向保護屏障

組合型 PCR 實驗(yan)室應(ying)設(she)置緩(huan)沖(chong)間(jian)(jian),緩(huan)沖(chong)間(jian)(jian)在實驗(yan)核(he)心區(qu)(qu)與(yu)專用(yong)走廊區(qu)(qu)域形成一(yi)道雙向保護屏障,既阻止外部(bu)環境(jing)的(de)潛在污染物(wu)質如氣溶膠等進入(ru)實驗(yan)核(he)心區(qu)(qu),同(tong)時(shi)又控制核(he)心實驗(yan)(產物(wu)分析)的(de)有(you)害物(wu)質滲入(ru)環境(jing),對實驗(yan)區(qu)(qu)外部(bu)環境(jing)及內部(bu)試劑均起到了(le)保護作用(yong)。

本文節選自《二(er)級(ji)生物安全實驗(yan)室設計建造(zao)與運行管理指南(nan)》

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