組(zu)織細胞(bao)培(pei)(pei)養(yang)技術與其(qi)他一般實(shi)(shi)驗(yan)室(shi)(shi)(shi)工作的主要區別在于要求保持無(wu)菌(jun)操(cao)作,避免微生物(wu)及其(qi)他有害因素的影響。其(qi)中(zhong)動物(wu)細胞(bao)培(pei)(pei)養(yang)和(he)植物(wu)細胞(bao)培(pei)(pei)養(yang)的環(huan)境要求也有所不同,今天為(wei)大家介紹(shao)植物(wu)組(zu)織培(pei)(pei)養(yang)實(shi)(shi)驗(yan)室(shi)(shi)(shi)的常用(yong)儀器配置清單和(he)實(shi)(shi)驗(yan)室(shi)(shi)(shi)的基本操(cao)作。
一、植物組織培養實驗室的構成
組織(zhi)培養實驗室布局的總體要求:便于(yu)(yu)隔(ge)離、便于(yu)(yu)操作、便于(yu)(yu)滅菌、便于(yu)(yu)觀察(cha)
完整的組織培養室(shi)(shi)通常包(bao)括洗(xi)滌室(shi)(shi)、準備室(shi)(shi)(化學實驗室(shi)(shi))、接種(zhong)室(shi)(shi)(無菌操(cao)作室(shi)(shi))、培養室(shi)(shi)、細胞學實驗室(shi)(shi)等部分(fen)。可以根(gen)據實際需(xu)要和(he)條(tiao)件進行設計。
但從功能上(shang)至少(shao)包括(kuo)準(zhun)(zhun)備室(化學實驗室)、接種室以(yi)及培(pei)養室三部(bu)分,并(bing)且按順序排列。在準(zhun)(zhun)備室與接種室之間應留有緩(huan)沖空間(或建立緩(huan)沖室)。
一)準備室(化學實驗室)
1、主要功能
用于培(pei)養(yang)器皿的(de)清洗、干燥(zao)、培(pei)養(yang)基的(de)配制、分裝和滅菌、試管(guan)苗的(de)出瓶及整理等(deng)工作。
2、主要(yao)儀器設備(bei)及用品
(1)藥品柜、實驗臺、水槽
(2)超聲波清洗儀
(3)涼干架
(4)干燥箱
(5)各種玻璃器(qi)皿(燒杯、量筒(tong)、容量瓶(ping)、試劑瓶(ping)、三角(jiao)瓶(ping)等)
(6)蒸餾水制造裝置
(7)天(tian)平(萬分之一、百分之一)
(8)移液器
(9)pH計(ji)(不同范圍pH試紙)
(10)水浴鍋
(11)微波爐
(12)電爐
(13)磁力攪拌器
(14)蠕動(dong)泵及培養基(ji)分裝用(yong)品(pin)
(15)高壓滅菌鍋
(16)冰箱
2)接種室(無菌操作室)
1、功能
接種材料的(de)滅菌、接種以(yi)及培養物的(de)繼代轉接等。
接種(zhong)室要求保(bao)持潔(jie)凈,與(yu)化學實(shi)驗室之(zhi)間(jian)應(ying)設置緩沖(chong)室。
2、主要儀器設備(bei)及(ji)用品
(1)超凈工作臺
(2)紫外燈
(3)小推車
(4)擱架
(5)瓷盤
(6)接種工具
各(ge)種鑷子、解剖刀(dao)、手(shou)術剪(jian)、普(pu)通剪(jian)刀(dao)、接種針、酒(jiu)精燈、手(shou)持噴(pen)霧器、細菌過濾(lv)器等。
三)培養室
1、功能
主要用于植物材料(liao)的培養(yang)。
要(yao)求室內潔凈并能保持一定的溫(wen)度、光(guang)照以及(ji)濕(shi)度,以促進植物材料(liao)的生長和(he)分化。
2、主要儀(yi)器設備(bei)及(ji)用品
(1)培養架及燈管
(2)搖床(振蕩器)
(3)空調
(4)自動定時器
(5)加濕及除濕器
(6)光照培養箱
四)細胞學實驗室
1、功能
主要用于培養材料的顯微觀(guan)察及(ji)照相(xiang)等。
2、主要儀式(shi)設(she)備及用品
體視(shi)顯微鏡、普通(tong)顯微鏡、倒置顯微鏡、熒光顯微鏡、配(pei)套(tao)顯微照相裝置、普通(tong)相機(ji)或數碼相機(ji)、切片機(ji)及配(pei)套(tao)制片及染色用(yong)品等。
體(ti)視顯微鏡用途:放大倍數5~80倍主要(yao)用于(yu)植物形態分化的(de)觀察、莖(jing)尖的(de)切取。
普通(tong)光學顯(xian)微鏡用途:用于植物(wu)切(qie)片觀(guan)察,確定(ding)植物(wu)的發育進程(cheng),如:不定(ding)芽、不定(ding)胚的分化(hua)(hua)過程(cheng)以及其它器官組織的分化(hua)(hua)等。
倒置顯微鏡用途:主(zhu)要(yao)用于細(xi)胞(bao)、原生(sheng)質體的細(xi)胞(bao)分裂和細(xi)胞(bao)團(tuan)形成(cheng)的觀(guan)察。
二、實驗室基本操作
一)洗滌
1、普通器皿∶采用洗(xi)(xi)衣粉、洗(xi)(xi)潔精等中性洗(xi)(xi)滌劑洗(xi)(xi)滌。
2、難清(qing)洗(xi)器皿及移液管等∶用(yong)水清(qing)洗(xi)后再(zai)用(yong)重鉻酸鉀洗(xi)液浸(jin)泡,最(zui)后清(qing)水沖洗(xi),或用(yong)超聲(sheng)波儀清(qing)洗(xi)。
二)滅菌
滅(mie)菌是指(zhi)用物(wu)理(li)和化學方(fang)法殺死物(wu)體表面(mian)和內部的(de)所(suo)有微(wei)生物(wu)(包(bao)括芽胞) , 使之呈無菌狀(zhuang)態。經過滅(mie)菌的(de)物(wu)品稱“無菌物(wu)品”。
1、器(qi)具滅菌:培養(yang)皿、解剖刀、鑷子等用品。
(1)干(gan)熱滅菌:鋁(lv)箔包好后,放于恒溫干(gan)燥箱內,150℃保(bao)溫2小時(shi),成(cheng)本較高。
(2)高壓蒸(zheng)汽滅菌(jun):高壓蒸(zheng)汽滅菌(jun)鍋(guo)內120℃ 15-20 分鐘。
(3)灼燒(shao)(shao)滅菌:接種時,解剖刀及(ji)鑷子等(deng)浸(jin)入95%乙醇,然后取出在酒精燈(deng)火(huo)焰(yan)上灼燒(shao)(shao)殺(sha)菌。
2、培養基滅菌
采用高壓蒸汽滅菌。120℃ 15-20分(fen)鐘。
培養(yang)基體(ti)積越大,滅(mie)菌時間越長(chang)。
3、不(bu)耐高溫材料的滅菌(jun)
采(cai)用過濾滅(mie)菌,如IAA、ZT、天然有機添加物等。
4、外植體的表面滅菌
(1)流(liu)水沖洗(xi)10-20分鐘或(huo)更長時間
(2)70-75%酒精中浸泡30秒
(3)0.1%-0.2%氯化汞液(ye)中浸(jin)泡10分(fen)鐘(zhong)左右 或 在10%的次氯酸鈉、飽和漂(piao)泊粉浸(jin)泡30分(fen)鐘(zhong)左右
(4)蒸(zheng)餾水沖洗4-5次
(5)備用
三)無菌操作
實驗(yan)(yan)員消(xiao)毒、實驗(yan)(yan)室、無菌臺滅(mie)菌→實驗(yan)(yan)器(qi)材滅(mie)菌→無菌接種→消(xiao)毒→實驗(yan)(yan)臺衛生(sheng)→培養室培養
1、消毒(du),更換實(shi)驗服、帽子與鞋子,進入接種室。
2、打開超凈工作(zuo)臺和(he)無菌操作(zuo)室的紫外燈,照射40min左右,后關閉。
3、開啟過濾室風機,使無菌風吹拂(fu)工作(zuo)臺面和四周的臺壁(bi)。
4、用70%-75%的酒精擦拭工作臺(tai)和雙手。
5、用(yong)沾有70%-75%的(de)酒精的(de)紗(sha)布擦拭盛(sheng)培(pei)養基的(de)培(pei)養器皿,放進工作臺(tai)。
6、把(ba)解剖刀(dao)、剪(jian)刀(dao)、鑷子(zi)等器(qi)械浸泡在95%的(de)酒精(jing)中,再在火(huo)焰上消毒,放在器(qi)械架(jia)上。
7、在(zai)酒精(jing)燈火焰(yan)附近切(qie)割備用的接(jie)種材料。
8、打(da)開瓶(ping)口,用火(huo)焰燒(shao)瓶(ping)口,轉(zhuan)動(dong)瓶(ping)口使瓶(ping)口部分都燒(shao)到。
9、取(qu)下接種(zhong)器械,在火焰上消毒。
10、把培(pei)養材料(liao)放入培(pei)養瓶,蓋上(shang)瓶口。
11、接(jie)種結束后,清(qing)理和(he)關閉(bi)超凈工作臺(tai)。
注意:操作(zuo)期間應經(jing)常用(yong)70%-75%的酒精擦(ca)拭工作(zuo)臺(tai)和(he)雙(shuang)手,接(jie)種器械應反(fan)復(fu)在(zai)(zai)95%的酒精中(zhong)浸泡和(he)在(zai)(zai)火(huo)焰上消毒。
以上設備清單僅供大家參考,具體配置需根據各位老師、使用者的實際需求策劃。希望今天的分享能對大家有所幫助。植物組織培養實驗室設計認準華安,植物組織培養實驗室建設經驗豐富,承接各類實驗室裝修設計,歡迎(ying)來電(dian)咨詢~