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植物組織培養實驗室建設要求(如何建設植物組培實驗室)

植物組織培養實驗室

植物組織培養實驗室的設置:植物組織培養實驗室與其他實驗室的主要區別是要求無菌操作,避免微生物及其他有害因素的影響。植物組織培養實驗室的面積大小和裝備取決于兩個因素:一是實驗性質和研究內容,二是能承受的經費能力。然而,一個標準的植物組織培養實驗室必須具備下列條件:

①清洗和(he)儲存玻(bo)璃器(qi)皿、塑料器(qi)皿和(he)其他實驗器(qi)皿;

②培(pei)養基的配(pei)制、滅菌和儲存;

③植物(wu)材(cai)料的無菌操(cao)作;

④可控溫度、光照、濕度等條件,以便對材料(liao)進行體外培養;

⑤培(pei)養(yang)物生長(chang)發育過(guo)程的顯(xian)微(wei)觀察。因此(ci),植物組(zu)織(zhi)培(pei)養(yang)實驗室(shi)至少需要有(you)三間(jian)(jian)相連(lian)但(dan)相互(hu)隔開的房間(jian)(jian):第(di)一間(jian)(jian)用(yong)(yong)于玻(bo)璃器皿的清(qing)洗和儲存(cun),以及培(pei)養(yang)基的制備(稱為培(pei)養(yang)基室(shi));第(di)二間(jian)(jian)用(yong)(yong)于無(wu)菌操作(稱為接(jie)種室(shi));第(di)三間(jian)(jian)用(yong)(yong)于放置(zhi)培(pei)養(yang)物(稱為培(pei)養(yang)室(shi))。此(ci)外,如果(guo)條件許可,應配備能進行(xing)組(zu)織(zhi)和細胞(bao)(bao)生長(chang)顯(xian)微(wei)觀察的細胞(bao)(bao)學實驗室(shi)。

(一)培養基室

培養(yang)(yang)(yang)基(ji)(ji)室(shi)的(de)(de)(de)清洗(xi)(xi)(xi)區(qu)應(ying)備(bei)(bei)有各(ge)種類(lei)型(xing)的(de)(de)(de)毛(mao)刷、大水(shui)(shui)槽和冷熱水(shui)(shui)源。此(ci)外,還應(ying)備(bei)(bei)有塑料桶,用(yong)以(yi)浸泡需(xu)要清洗(xi)(xi)(xi)的(de)(de)(de)實驗室(shi)器(qi)皿(min);鼓風(feng)干(gan)燥箱,用(yong)以(yi)干(gan)燥清洗(xi)(xi)(xi)后的(de)(de)(de)器(qi)皿(min);防塵廚,用(yong)以(yi)儲存(cun)干(gan)凈(jing)的(de)(de)(de)器(qi)皿(min)。條件允(yun)許的(de)(de)(de)話,清洗(xi)(xi)(xi)區(qu)應(ying)單獨設(she)一(yi)個房間。如(ru)果培養(yang)(yang)(yang)基(ji)(ji)的(de)(de)(de)制備(bei)(bei)和器(qi)皿(min)的(de)(de)(de)清洗(xi)(xi)(xi)在同一(yi)個房間內進行,應(ying)特別注意不要使(shi)清洗(xi)(xi)(xi)干(gan)擾培養(yang)(yang)(yang)基(ji)(ji)的(de)(de)(de)制備(bei)(bei),嚴格防止肥皂水(shui)(shui)等(deng)濺入培養(yang)(yang)(yang)基(ji)(ji)內。可(ke)以(yi)在清洗(xi)(xi)(xi)區(qu)與培養(yang)(yang)(yang)基(ji)(ji)制備(bei)(bei)區(qu)之(zhi)間臨(lin)時(shi)加一(yi)塊擋板(ban),或(huo)把清洗(xi)(xi)(xi)時(shi)間和配制培養(yang)(yang)(yang)基(ji)(ji)時(shi)間錯(cuo)開。

配制培養基所需的一般設備包括以下幾種。

①工(gong)作(zuo)(zuo)臺(tai):工(gong)作(zuo)(zuo)臺(tai)的高(gao)度應適合于操作(zuo)(zuo)人員工(gong)作(zuo)(zuo),要求表面(mian)平整、耐(nai)高(gao)溫、放置水平。

②低(di)溫冰箱(xiang):用以(yi)儲存(cun)長期(qi)保(bao)存(cun)的藥品。

③普(pu)通冰箱:用以儲存各種化學藥品(pin)、植物(wu)材料和短期儲存儲備液(ye)及母液(ye)等。

④大塑(su)料瓶:用以儲存蒸餾(liu)水。

⑤天平:用于稱量。

⑥電(dian)熱磁力攪(jiao)拌(ban)器:用(yong)以溶(rong)解化(hua)學藥品。

⑦電爐:用(yong)于加熱溶化瓊脂(zhi)和手(shou)提式高壓(ya)滅菌鍋的(de)加熱。

⑧酸度計或pH試(shi)紙(zhi)。

⑨抽氣機或(huo)真空泵:用以輔助(zhu)過濾滅菌。

⑩恒溫水浴(yu):用于融化瓊(qiong)脂。

?高壓滅菌鍋:用以進(jin)行培(pei)養基滅菌。

?其他用具。

(二)接種室

接(jie)種(zhong)室(shi)(shi)(shi)也(ye)稱為無(wu)(wu)菌(jun)(jun)操(cao)作(zuo)室(shi)(shi)(shi),好能與(yu)外界(jie)隔離,不(bu)能穿行或(huo)不(bu)受其(qi)他(ta)干擾。接(jie)種(zhong)室(shi)(shi)(shi)分更(geng)衣間(jian)(jian)、緩(huan)沖間(jian)(jian)及操(cao)作(zuo)間(jian)(jian)三(san)部(bu)分。更(geng)衣間(jian)(jian)供更(geng)換衣服、鞋子及穿戴帽子和口罩之用(yong)(yong)。緩(huan)沖間(jian)(jian)位于更(geng)衣間(jian)(jian)與(yu)操(cao)作(zuo)間(jian)(jian)之間(jian)(jian),目的(de)(de)是為了保證操(cao)作(zuo)間(jian)(jian)的(de)(de)無(wu)(wu)菌(jun)(jun)環境(jing),同(tong)時可(ke)放(fang)置恒溫箱及某些(xie)小型儀(yi)器(qi)。操(cao)作(zuo)間(jian)(jian)則用(yong)(yong)于無(wu)(wu)菌(jun)(jun)操(cao)作(zuo),其(qi)大小要適當,且(qie)其(qi)頂部(bu)不(bu)宜過(guo)高以保證紫外線的(de)(de)滅菌(jun)(jun)效果,墻壁光滑無(wu)(wu)死(si)角(jiao)以便清洗和消(xiao)(xiao)(xiao)毒(du)。接(jie)種(zhong)室(shi)(shi)(shi)為密閉式(shi),用(yong)(yong)紫外線滅菌(jun)(jun)燈進行空(kong)氣消(xiao)(xiao)(xiao)毒(du)。有些(xie)實(shi)驗(yan)室(shi)(shi)(shi)使用(yong)(yong)電子消(xiao)(xiao)(xiao)毒(du)滅菌(jun)(jun)器(qi),它在高壓電場(chang)作(zuo)用(yong)(yong)下,電子管的(de)(de)內外電極發生強烈(lie)電子轟擊(ji),使空(kong)氣電離而將空(kong)氣中的(de)(de)氧(yang)轉換成臭(chou)(chou)氧(yang)。臭(chou)(chou)氧(yang)是一種(zhong)強氧(yang)化劑,能與(yu)細菌(jun)(jun)的(de)(de)胞(bao)膜(mo)及酶蛋白進行氧(yang)化分解反應,因此靠(kao)臭(chou)(chou)氧(yang)氣體(ti)彌(mi)漫性擴(kuo)散達到殺菌(jun)(jun)的(de)(de)目的(de)(de),使消(xiao)(xiao)(xiao)毒(du)時沒有死(si)角(jiao)。消(xiao)(xiao)(xiao)毒(du)后空(kong)間(jian)(jian)內的(de)(de)殘留(liu)臭(chou)(chou)氧(yang)只需30~40min即能自(zi)行還原(yuan)成氧(yang)氣,對空(kong)間(jian)(jian)不(bu)留(liu)異(yi)味、消(xiao)(xiao)(xiao)毒(du)物體(ti)表面(mian)不(bu)留(liu)殘毒(du)。

超凈工作臺
超凈工作臺

接種室的主(zhu)要儀器設(she)備是超(chao)凈(jing)工作臺。超(chao)凈(jing)工作臺可(ke)直接購買,安裝(zhuang)方(fang)便,占用(yong)空間小且凈(jing)化效果很好,為植物組(zu)織培養(yang)工作提供了良好的無菌操作環境。

(三)培養室

培(pei)(pei)養室的溫(wen)(wen)度(du)(du)必須是可(ke)控的,一般是用空調或熱風機使溫(wen)(wen)度(du)(du)保持(chi)在(25±12)℃。若要求(qiu)更高或更低(di)的溫(wen)(wen)度(du)(du),可(ke)使用裝有熒光燈(deng)的培(pei)(pei)養箱。培(pei)(pei)養箱可(ke)安(an)裝在培(pei)(pei)養室之(zhi)外任何方(fang)便和安(an)全的地方(fang)。

植物組織培養要求(qiu)一定(ding)的光照,采用日光燈源(yuan),一般(ban)光照強(qiang)度為1000~30001x。但有些實(shi)驗需要在散射(she)光下進(jin)行(xing),有些則要求(qiu)完全黑暗條(tiao)件。因此,在設備(bei)上(shang)對此應有所準備(bei)。光源(yuan)可由自(zi)動定(ding)時(shi)開關控(kong)制。暗培養一般(ban)是在特(te)制的木(mu)櫥(chu)內進(jin)行(xing)或加(jia)蓋黑布。

培養室的(de)濕(shi)(shi)度(du)應控制在(zai)相對(dui)濕(shi)(shi)度(du)80%左(zuo)右,當(dang)培養室的(de)相對(dui)濕(shi)(shi)度(du)降低(di)到50%以(yi)下(xia)時,應采取措施增加濕(shi)(shi)度(du),以(yi)免(mian)培養基變(bian)干(gan)。如(ru)果(guo)濕(shi)(shi)度(du)太高則(ze)應除濕(shi)(shi),以(yi)免(mian)培養瓶蓋塞發潮,增加污染的(de)機會。

在培(pei)(pei)(pei)養(yang)室內應設有(you)(you)若干培(pei)(pei)(pei)養(yang)架(jia)(jia)(jia)以放置(zhi)培(pei)(pei)(pei)養(yang)物。培(pei)(pei)(pei)養(yang)架(jia)(jia)(jia)大小一(yi)般為1200mm×600mm×400mm,層數根據培(pei)(pei)(pei)養(yang)室的(de)(de)(de)(de)空(kong)間高度而定,每層培(pei)(pei)(pei)養(yang)架(jia)(jia)(jia)裝上(shang)玻(bo)璃(li)板。但玻(bo)璃(li)板下(xia)面的(de)(de)(de)(de)日(ri)(ri)光(guang)燈(deng)(deng)在工(gong)作時易使玻(bo)璃(li)發熱,使放置(zhi)其上(shang)的(de)(de)(de)(de)培(pei)(pei)(pei)養(yang)瓶及(ji)培(pei)(pei)(pei)養(yang)基的(de)(de)(de)(de)溫度增(zeng)加,影響培(pei)(pei)(pei)養(yang)效果。安(an)裝剛硬的(de)(de)(de)(de)鐵(tie)絲網(wang)或細鋼管(guan),在其上(shang)放篩孔(kong)塑料盤,以便空(kong)氣流動和穩定溫度,同時也可(ke)使頂層的(de)(de)(de)(de)燈(deng)(deng)光(guang)能透射到下(xia)層的(de)(de)(de)(de)培(pei)(pei)(pei)養(yang)物上(shang)。培(pei)(pei)(pei)養(yang)架(jia)(jia)(jia)可(ke)以木制(zhi)也可(ke)以鋼制(zhi),每層分別(bie)裝有(you)(you)日(ri)(ri)光(guang)燈(deng)(deng)管(guan)。燈(deng)(deng)管(guan)和上(shang)一(yi)層架(jia)(jia)(jia)子之間裝有(you)(you)隔(ge)熱層,以免上(shang)層培(pei)(pei)(pei)養(yang)物的(de)(de)(de)(de)底部受熱。

三角(jiao)瓶、玻璃罐或培養(yang)皿(min)都可直接(jie)置(zhi)于培養(yang)架(jia)(jia)上,或先(xian)置(zhi)于大小(xiao)合適的盤子上。再將盤子置(zhi)于培養(yang)架(jia)(jia)上。所用(yong)的容器若為試(shi)(shi)管,就需要有(you)試(shi)(shi)管架(jia)(jia)。試(shi)(shi)管架(jia)(jia)可用(yong)鐵絲制(zhi)作,每個試(shi)(shi)管架(jia)(jia)能裝(zhuang)25個或50個試(shi)(shi)管。培養(yang)容器必須(xu)粘(zhan)上標簽或用(yong)記號(hao)筆標注(zhu),注(zhu)明詳細(xi)的實驗細(xi)節(植物(wu)名稱、外(wai)植體、培養(yang)基(ji)、培養(yang)時間等)。

培養室內應設有搖(yao)床(chuang),以(yi)(yi)便進行液體懸浮(fu)培養。搖(yao)床(chuang)可以(yi)(yi)是(shi)平動(dong)式(shi)的,也可以(yi)(yi)是(shi)旋(xuan)轉式(shi)的。應選(xuan)購溫光可控式(shi)搖(yao)床(chuang)。

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