如何建造一個標準的PCR實驗室？PCR實驗(yan)室如何設(she)計規劃才(cai)堪稱(cheng)專業？PCR實驗(yan)室管(guan)理又有哪些注意要點？相信很多人都有這樣的疑(yi)問，那么(me)今(jin)天小編給你從頭開始(shi)，搞懂PCR實驗(yan)室規劃設(she)計。

一、PCR實驗室劃分區域

標準的(de)PCR實驗室分(fen)為(wei)四個區(qu)(qu)域，分(fen)別為(wei)：試劑(ji)配制區(qu)(qu)、樣品處理區(qu)(qu)、核酸擴(kuo)增區(qu)(qu)、產物分(fen)析(xi)區(qu)(qu)。若使用全(quan)自動分(fen)析(xi)儀，四大(da)區(qu)(qu)域可適(shi)當合并(bing)。

二、各區的功能介紹

1、試劑準備區：擴增試劑的(de)配制(zhi)、分裝和保存(cun)。

樣品處理區：樣品登記、分裝；核酸提取、保存(cun)和(he)加樣。

擴(kuo)(kuo)增產物(wu)分(fen)析(xi)區：擴(kuo)(kuo)增產物(wu)的測定、結果分(fen)析(xi)、登記(ji)及報(bao)告。

2、擴增前區(qu)(qu)與(yu)擴增后區(qu)(qu)應嚴格分開，須使(shi)用不同(tong)的房間，兩(liang)區(qu)(qu)之間應有一(yi)定的間隔。使(shi)用商品化試(shi)劑(ji)盒可(ke)在樣品處理(li)區(qu)(qu)進行少量(liang)試(shi)劑(ji)配制。

3、在(zai)滿足下列操作和清潔處理要求的前(qian)提下樣品處理區(qu)和試劑準備區(qu)可設(she)在(zai)同一(yi)房間內：

在生物(wu)安全柜內操作。

每個實驗人(ren)員、實驗組(zu)分別使用各自(zi)的(de)試劑及耗材。

盛放污染材料的器皿密封并一次(ci)性使用。

用有效的(de)方(fang)法對(dui)操(cao)作區域和共享(xiang)器具在實驗前后進行(xing)清潔(jie)及消毒。

三、PCR實驗室建設規劃要點

1、主體(ti)(ti)結構：主體(ti)(ti)為彩(cai)鋼板、鋁合(he)金型材。室內所有(you)陰(yin)角(jiao)、陽角(jiao)均采用鋁合(he)金50內圓角(jiao)鋁，從(cong)而解決容易污染(ran)、積塵(chen)、不易清掃(sao)等問(wen)題。結構牢(lao)固，線條簡(jian)明，美觀大(da)方，密(mi)封(feng)性好(hao)。

2、標準的(de)(de)三區分(fen)(fen)隔(ge)和(he)(he)氣壓(ya)調節(jie)：將(jiang)PCR過(guo)程分(fen)(fen)成(cheng)試劑準備、標本(ben)制備和(he)(he)PCR擴增檢(jian)測三個(ge)的(de)(de)實(shi)驗區。整(zheng)個(ge)區域有一(yi)個(ge)整(zheng)體緩沖(chong)走廊。每(mei)個(ge)實(shi)驗區設置(zhi)有緩沖(chong)區，同(tong)時各區通過(guo)氣壓(ya)調節(jie)，使整(zheng)個(ge)PCR實(shi)驗過(guo)程中試劑和(he)(he)標本(ben)免受氣溶膠的(de)(de)污(wu)染并降低擴增產物對人員和(he)(he)環境(jing)的(de)(de)污(wu)染。

3、 消毒：在(zai)三個實驗區(qu)和三個緩沖區(qu)頂部以及傳送窗內部安裝有紫外燈，供(gong)消毒用。在(zai)試劑準備區(qu)和標本(ben)制備區(qu) 還應設置紫外線燈，對實驗桌進行局部消毒。

4、機械連(lian)鎖(suo)(suo)不(bu)銹鋼(gang)傳遞(di)窗(chuang)：試劑和標本通過(guo)機械連(lian)鎖(suo)(suo)不(bu)銹鋼(gang)（不(bu)建議使用電(dian)子連(lian)鎖(suo)(suo)方(fang)式）傳遞(di)窗(chuang)傳遞(di)，保證試劑和標本在傳遞(di)過(guo)程中不(bu)受污(wu)染（人物(wu)分(fen)流）。

5、 地(di)(di)面(mian)(mian)：地(di)(di)面(mian)(mian)建(jian)議使用PVC卷材(cai)地(di)(di)面(mian)(mian)或(huo)自流坪地(di)(di)面(mian)(mian)，整體性好。便(bian)于(yu)進(jin)行清掃，耐(nai)腐蝕。沒有條件的也可采用水磨(mo)石地(di)(di)面(mian)(mian)，或(huo)大塊(kuai)的瓷磚(zhuan)（800mm×800mm）接縫需要小于(yu)2mm。

6、照明：燈具要選用凈化燈具，能達到便于清洗、不積塵的特(te)點。

四、在建設的過程中應注意

1、規范的(de)安裝流(liu)(liu)程和全(quan)面的(de)服(fu)務(wu)流(liu)(liu)程。

2、嚴格按照規范科學設(she)計的安裝流程。

3、安(an)裝(zhuang)前需要(yao)確定(ding)以下安(an)裝(zhuang)條件，如：電(dian)源(yuan)電(dian)壓(ya)，電(dian)源(yuan)進(jin)(jin)線(xian)位置(zhi)，電(dian)話網絡線(xian)進(jin)(jin)線(xian)位置(zhi)，進(jin)(jin)水(shui)(shui)水(shui)(shui)壓(ya)，最小安(an)裝(zhuang)空間，地(di)面平(ping)整度，通風孔(kong)、進(jin)(jin)水(shui)(shui)管和(he)下水(shui)(shui)管的(de)位置(zhi)等，理想(xiang)狀(zhuang)態的(de)空間尺寸和(he)通風口尺寸。

五、PCR實驗室設計要點

PCR實(shi)(shi)驗室可(ke)以是分散形(xing)式，也(ye)可(ke)以是組合形(xing)式。完成一(yi)組PCR實(shi)(shi)驗，通常應經過試劑配制(zhi)、樣品(pin)處理(li)、核(he)酸擴增(zeng)及產物分析四(si)個實(shi)(shi)驗過程，若實(shi)(shi)驗工藝需要，還應增(zeng)加樣品(pin)粉碎過程。

1、分(fen)散形(xing)式(shi)PCR實(shi)(shi)驗(yan)室(shi)：所謂分(fen)散形(xing)式(shi)PCR實(shi)(shi)驗(yan)室(shi)，是指(zhi)完(wan)成上述實(shi)(shi)驗(yan)過程(cheng)的實(shi)(shi)驗(yan)用(yong)房彼此相(xiang)距(ju)較遠，呈分(fen)散布置(zhi)(zhi)形(xing)式(shi)。對于(yu)這種布置(zhi)(zhi)形(xing)式(shi)的PCR實(shi)(shi)驗(yan)室(shi)，由于(yu)各個實(shi)(shi)驗(yan)之間不易相(xiang)互干(gan)擾，因此無需特殊條件要(yao)求。

2、組(zu)合形(xing)式PCR實(shi)(shi)驗(yan)室：所謂組(zu)合形(xing)式PCR實(shi)(shi)驗(yan)室, 是指(zhi)完成(cheng)PCR四個(ge)實(shi)(shi)驗(yan)過程的(de)(de)實(shi)(shi)驗(yan)用房(fang)相鄰布置(zhi)，組(zu)成(cheng)***實(shi)(shi)驗(yan)區域的(de)(de)形(xing)式。對于組(zu)合形(xing)式PCR實(shi)(shi)驗(yan)室，由于各(ge)個(ge)實(shi)(shi)驗(yan)間集中(zhong)布置(zhi)，容易造成(cheng)相互干擾，因此，對總(zong)體(ti)***以(yi)及(ji)屏障系統具有一定的(de)(de)要求。各(ge)室在入口處設緩沖間，以(yi)減少(shao)室內外空(kong)氣交換。

3、一些瑣碎的(de)、不可忽略的(de)設計

① 實(shi)驗室空調通風系統設(she)計及壓(ya)力控制

PCR實驗(yan)室并沒有嚴格的凈(jing)化(hua)要求，但是為(wei)避免各個(ge)實驗(yan)區(qu)域間交叉(cha)污染的可能(neng)性，宜采(cai)用全(quan)(quan)送全(quan)(quan)排的氣流組織形式(shi)。同時，要嚴格控制送、排風的比例以(yi)保證各實驗(yan)區(qu)的壓力要求。

② 污(wu)染的預防與控制

PCR實驗室設計的核(he)心問題是(shi)如何(he)避免污(wu)(wu)(wu)染(ran)(ran)。在實際工作(zuo)中，常見(jian)的有以(yi)下(xia)幾種污(wu)(wu)(wu)染(ran)(ran)類(lei)型(xing)：擴增產(chan)物(wu)(wu)的污(wu)(wu)(wu)染(ran)(ran)；天然基因(yin)組DNA的污(wu)(wu)(wu)染(ran)(ran)；試劑(ji)的污(wu)(wu)(wu)染(ran)(ran)以(yi)及標本間(jian)的污(wu)(wu)(wu)染(ran)(ran)。由于(yu)一旦發生污(wu)(wu)(wu)染(ran)(ran)，實驗(yan)(yan)就(jiu)必(bi)須停止，直到找到污(wu)(wu)(wu)染(ran)(ran)源為(wei)止，而且(qie)實驗(yan)(yan)結果必(bi)須作(zuo)廢，需(xu)重新進行(xing)實驗(yan)(yan)。所以(yi)發生污(wu)(wu)(wu)染(ran)(ran)后(hou)再圍(wei)繞(rao)實驗(yan)(yan)室來(lai)尋找污(wu)(wu)(wu)染(ran)(ran)源不但(dan)耗(hao)時(shi)而且(qie)繁瑣，浪(lang)費人(ren)力(li)物(wu)(wu)力(li)。因(yin)此(ci)要避免污(wu)(wu)(wu)染(ran)(ran)，首先應是(shi)預(yu)防，而不是(shi)排除(chu)。

4、一些經驗：

試劑(ji)配制室及樣品處理室宜呈微(wei)正壓，以防外(wai)界含核酸氣溶膠的空(kong)氣進入(ru)，造(zao)成污染(ran)。

可(ke)以通過控(kong)制進風(feng)風(feng)量(liang)大于排風(feng)風(feng)量(liang)達到(dao)正壓效果。

核(he)酸(suan)(suan)擴增(zeng)室及產(chan)物分析室應呈微負(fu)壓(ya)，以防含核(he)酸(suan)(suan)的氣溶膠擴散出去污染試劑與(yu)樣品，可以通過控制(zhi)排(pai)風(feng)風(feng)量(liang)大于進(jin)風(feng)風(feng)量(liang)達到負(fu)壓(ya)效果。

在(zai)理想(xiang)情況下，PCR實驗室(shi)(shi)緩沖間(jian)內，可設置正(zheng)壓，使(shi)室(shi)(shi)內空(kong)氣不流向室(shi)(shi)外，室(shi)(shi)外空(kong)氣不流向室(shi)(shi)內。

PCR實驗室進(jin)風由原有中央(yang)空(kong)調控制，要求將中央(yang)空(kong)調風口安裝到指定(ding)定(ding)點，且高度為地面鋪裝好后2600mm處。

如果使用熒光PCR儀，擴增室和產物分析室可(ke)以合并。

若房間(jian)(jian)進深允許，可(ke)設PCR內部專(zhuan)用走廊(lang)。需(xu)要指出(chu)的是在減少室內外(wai)空氣交換方面，緩沖間(jian)(jian)比專(zhuan)用走廊(lang)更有意義。

各個區域(yu)之(zhi)間應具備單向的實(shi)驗(yan)工藝流、物流、人流與氣流，形成單向流程的保(bao)護屏障(zhang)，避(bi)免實(shi)驗(yan)之(zhi)間的相互干擾，防(fang)止核酸氣溶膠對實(shi)驗(yan)過程造成污染產生假(jia)性結果。

實驗室的墻體(ti)，包括頂棚，應結構(gou)牢固、氣密(mi)性好；所有(you)陰(yin)角(jiao)宜采用圓(yuan)弧形線條過渡；墻體(ti)內壁光潔(jie)、不吸附、耐(nai)(nai)腐(fu)蝕、易(yi)清洗消(xiao)毒；地面材料應滿足無縫隙、無滲漏、光潔(jie)、耐(nai)(nai)腐(fu)蝕的要求。

六、PCR實驗室主要設備

1、試劑(ji)準備(bei)(bei)區：儀器設備(bei)(bei)主要有(you)(you)(you)冰箱、超凈(jing)臺、加(jia)樣(yang)器、混勻器、天平和離(li)心機等，加(jia)樣(yang)器、天平除(chu)了要專用(yong)外，還應(ying)有(you)(you)(you)定期校準。試劑(ji)分(fen)裝應(ying)在超凈(jing)臺中進(jin)行 擴(kuo)增反應(ying)混合液應(ying)使用(yong)分(fen)子生物學級的(de)，試劑(ji)制備(bei)(bei)好后應(ying)有(you)(you)(you)質檢：一(yi)是否有(you)(you)(you)污染、二是檢測試劑(ji)的(de)擴(kuo)增效果。

2、標本制備區：儀器(qi)設備主要(yao)有(you)生物(wu)安全柜、加樣器(qi)、離心機、溫育儀、混(hun)勻器(qi)等

3、擴(kuo)增(zeng)(zeng)區：擴(kuo)增(zeng)(zeng)區的(de)主要儀(yi)器是核酸擴(kuo)增(zeng)(zeng)儀(yi)、超(chao)凈臺、微量加樣器、離心機、可***紫外(wai)燈。擴(kuo)增(zeng)(zeng)儀(yi)需(xu)進(jin)行校準。并配備UPS電(dian)源，以防(fang)止(zhi)由于電(dian)壓的(de)波動，停電(dian)對擴(kuo)增(zeng)(zeng)效果的(de)影響(xiang)。

4、分(fen)析區：本區所使用的(de)儀器(qi)設備有酶標儀、洗板機、加樣器(qi)和水浴箱等 潔凈實驗區的(de)緩沖間部分(fen)面積(ji)不(bu)能超過(guo)主實驗室的(de)八分(fen)之一,這是有規定的(de)。

七、PCR實驗室不可缺少的嚴格管理

1、嚴格(ge)控制(zhi)進(jin)(jin)出(chu)實(shi)驗(yan)室的人員。與實(shi)驗(yan)無(wu)關的人員不得隨意進(jin)(jin)出(chu)實(shi)驗(yan)室，有條(tiao)件的情(qing)況下要(yao)設(she)置專門的通道(dao)和進(jin)(jin)出(chu)整個實(shi)驗(yan)區的門。

2、盡量減少在實驗區內不必要(yao)的走(zou)動以(yi)減少交叉污染的可能性(xing)。

3、擴增產(chan)物(wu)分析區是最主要的擴增產(chan)物(wu)的污(wu)染來源(yuan)，廢液不(bu)能(neng)在實驗室中傾倒，必須經消(xiao)毒(du)(du)液浸泡(pao)消(xiao)毒(du)(du)后在遠離(li)實驗室的地方(fang)棄掉，用過的吸頭等一次(ci)性材(cai)料也(ye)應經消(xiao)毒(du)(du)液浸泡(pao)消(xiao)毒(du)(du)后統一處理(li)，如焚燒(shao)等。

4、擴增產物(wu)分析區(qu)可能會用(yong)到某些可致(zhi)基因(yin)突變(bian)和有毒物(wu)質，應特別注意實(shi)驗人員的安(an)全防(fang)護。