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PCR實驗室分區及各分區主要功能作用

PCR實驗室有哪些分區?PCR實驗室的各個分區的功能是什么?PCR實驗室原則上分成四個區:試劑準備(bei)區、樣(yang)品(pin)制備(bei)區、擴增區、擴增產(chan)物分(fen)析區。每個(ge)獨立實(shi)(shi)驗區設置有(you)緩沖區,同時各區通(tong)過氣壓調節,使整(zheng)個(ge)PCR實(shi)(shi)驗過程中(zhong)試劑和(he)標本(ben)免受氣溶膠的污染(ran)并降低擴增產(chan)物(wu)對人員和(he)環境的污染(ran)。

PCR實驗室分區
PCR實驗室分區設計

一、PCR實驗室的四個分區

1、試(shi)(shi)(shi)(shi)劑(ji)準備(bei)(bei)區(qu)。此(ci)區(qu)主要(yao)是進行試(shi)(shi)(shi)(shi)劑(ji)的(de)(de)制(zhi)備(bei)(bei),分裝和主反應(ying)混(hun)合液的(de)(de)制(zhi)備(bei)(bei)。試(shi)(shi)(shi)(shi)劑(ji)盒用于樣(yang)品制(zhi)作(zuo)的(de)(de)材料(liao)應(ying)直(zhi)接(jie)運(yun)送至該區(qu)域。試(shi)(shi)(shi)(shi)劑(ji)原材料(liao)必須貯存在本(ben)區(qu)內,并在本(ben)區(qu)內制(zhi)備(bei)(bei)成所需的(de)(de)試(shi)(shi)(shi)(shi)劑(ji)。試(shi)(shi)(shi)(shi)劑(ji)準備(bei)(bei)區(qu)主要(yao)設備(bei)(bei)有天(tian)平、冰(bing)箱、離心機、加樣(yang)器、振蕩器等。對于,試(shi)(shi)(shi)(shi)劑(ji)準備(bei)(bei)區(qu)對氣流壓力的(de)(de)控制(zhi)并沒有嚴(yan)格要(yao)求,通常在+10Pa。

2、樣(yang)品制備(bei)區(qu)。此區(qu)主要(yao)(yao)進行樣(yang)品的(de)保存,核酸提取,貯存及期(qi)入至擴增反應管和(he)測定DNA的(de)合(he)成。樣(yang)品制備(bei)區(qu)主要(yao)(yao)設備(bei)有冰箱(xiang)、生物(wu)安(an)全柜、離心機(ji)、加樣(yang)器、振(zhen)蕩器等。樣(yang)品制備(bei)區(qu)的(de)壓(ya)力梯度要(yao)(yao)求為(wei):相對于鄰(lin)近(jin)區(qu)域為(wei)正壓(ya),以避(bi)免從(cong)鄰(lin)近(jin)區(qu)進入本區(qu)的(de)氣(qi)溶膠污染, 一般為(wei)+10Pa。

3、擴增(zeng)(zeng)區(qu)。此區(qu)主(zhu)要進行(xing)DNA的(de)擴增(zeng)(zeng)。另外,已制備(bei)的(de)DNA模(mo)板的(de)加入(ru)和(he)主(zhu)反(fan)應混合液(ye)(來自試劑(ji)準備(bei)區(qu))制備(bei)成反(fan)應混合液(ye)等也可在本區(qu)內進行(xing)。擴增(zeng)(zeng)區(qu)主(zhu)要設備(bei)有:擴增(zeng)(zeng)儀、冰箱、離心機、加樣器(qi)等。擴增(zeng)(zeng)區(qu)的(de)壓(ya)(ya)力梯度(du)要求為(wei)(wei):相對于鄰近區(qu)域為(wei)(wei)負壓(ya)(ya),為(wei)(wei)避免(mian)氣(qi)溶(rong)從本區(qu)漏出,一般為(wei)(wei)-25Pa。

4、擴(kuo)增(zeng)產(chan)物(wu)分(fen)析區。此(ci)區主要(yao)進(jin)行擴(kuo)增(zeng)產(chan)物(wu)的(de)測定(ding)。擴(kuo)增(zeng)產(chan)物(wu)分(fen)析區主要(yao)設備有酶標儀、洗(xi)板(ban)機(ji)、加樣器和(he)水(shui)浴箱等。擴(kuo)增(zeng)產(chan)物(wu)分(fen)析區的(de)壓(ya)力梯度的(de)要(yao)求(qiu)為(wei):相對于鄰近區域為(wei)負壓(ya),一般為(wei)-25Pa,以避免擴(kuo)增(zeng)產(chan)物(wu)從本區擴(kuo)散至其(qi)它區域。

二、PCR實驗室防護消毒

1、實驗室(shi)空氣消毒:實驗室(shi)每次(ci)檢(jian)測完畢后,需要進行(xing)空間消毒,清除實驗室(shi)殘留的(de)核酸。

2、工作臺面(mian)(mian)消(xiao)毒:每天(tian)實驗后使(shi)用(yong)消(xiao)毒液進行臺面(mian)(mian)、地(di)面(mian)(mian)消(xiao)毒。包(bao)括垃圾桶及垃圾袋都(dou)需要噴灑專用(yong)消(xiao)毒液,確保病毒被殺滅(mie)。

3、安全(quan)柜消(xiao)毒(du):每(mei)天實驗(yan)完成(cheng)后,對(dui)生物安全(quan)柜進(jin)行擦拭消(xiao)毒(du)。

4、轉運容器消毒:轉運及存放(fang)標本(ben)的容器,使用(yong)前后用(yong)消毒劑噴灑消毒。

5、塑料或有機玻璃材質消(xiao)毒(du):使用過氧乙酸或過氧化氫噴霧(噴淋(lin))消(xiao)毒(du),或擦拭消(xiao)毒(du)。

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